（一）原理及適用範（fàn）圍

將乳糖膽鹽選擇（zé）性培養基和TTC顯色劑加載在紙片上，經培養後能夠在紙片上生長並發酵乳糖產（chǎn）酸的（de）即為大腸菌群陽性，記錄每個稀釋度大腸菌（jun1）群陽性紙片數，根據大腸（cháng）菌群MPN表查出相應的大腸（cháng）菌（jun1）群（qún）數。食品大腸菌群檢驗紙片法與國標法（fǎ）中的九管法相（xiàng）對應，將原來幾步的試驗簡化為一步，時間由78h縮短為24h以內，省去了製備培養基、消和培養器皿的清洗（xǐ）處理等大（dà）量輔助性工作，隨時可以打開包裝進行抽樣檢測。執行標準：食品安全國家標準食品微生物檢驗大腸菌群計數MPN計數法（GB 4789.3）。

適用於各類食（shí）品（pǐn）、飲料等樣品中大腸菌群（qún）的快（kuài）速測定。

（二）操（cāo）作方法

樣品處理：

按無菌操作稱取樣品（pǐn）25g（或25mL）放入含有225mL滅菌磷（lín）酸緩（huǎn）衝液稀釋液（或生理（lǐ）鹽水）的取樣瓶或均質（zhì）杯中，經充分振搖做成1：10的樣品勻液。樣（yàng）品（pǐn）勻液的（de）pH值應（yīng）在6.5～7.5之間，必要時用1mol/L氫（qīng）氧化鈉或1mol/L鹽（yán）酸調節。用1mL滅菌吸管吸取1：10樣品勻液，注入含（hán）有9mL稀釋液的試管內，振搖試（shì）管製成1：100的樣品勻液。根據對樣品汙染狀況的估計，按上述操作，一次製成10倍遞增係列稀釋樣品勻液（yè）。每遞增稀釋1次（cì），換一支1mL無菌吸管或吸頭。從製備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min。

接種：

選取兩個稀釋度進行接種（zhǒng），普通食品一般采用1：10和1：100這兩個稀釋度，飲料采用原液和1：10兩個稀釋度。本（běn）品（pǐn）每份由三片（piàn）大紙片（接10mL，袋中二片疊放算（suàn）作一大片（piàn）），六片小紙片（接（jiē）1mL）組成。

用滅菌吸管（guǎn）吸取10mL 1：10樣品勻液加到含（hán）有大紙片的（de）塑料袋中（相當於接樣品1g），吸透後平放，做三個重複。再（zài）用（yòng）1mL滅菌吸管（guǎn）吸取1mL同一稀釋度的樣品勻（yún）液加到含有小紙片的塑料袋中（相當於接樣品0.1g），做三個重複。再另取一支1mL滅菌吸管吸取1mL 1：100樣品勻液加到含有小紙（zhǐ）片的塑料袋中（zhōng）（相（xiàng）當於接樣品0.01g），做三個重複。

培養：

將接種好的紙片（可疊放）放入36℃±1℃培養箱中（zhōng）培養15～24h。

（三）大腸菌群非常可能數（MPN）的報告。

若紙片變黃或（huò）在黃色（sè）背景上呈現紅色斑點為大腸（cháng）菌群陽性紙片。紙片保持紫藍色不變或在紫藍色背（bèi）景上呈現紅色斑點（diǎn），但周圍沒有黃（huáng）色均為大腸菌群陰性紙片。

記錄每（měi）個稀釋度大腸菌群陽性紙片數，根據《食品飲料大（dà）腸菌群MPN表》查出（chū）相應的大（dà）腸菌群數（shù）。

如接種的第一個（gè）梯度為原液，應（yīng）將表上查出的結果除以10。

（四（sì））注意事項

新的國家標準所用的單位改（gǎi）為每克（或毫升）檢樣中大腸（cháng）菌群非常可能數，標準的接種量為0.333g（mL），MPN表也是由此而設計。而使用本品（pǐn）的標準接種量為3.33g（mL），大紙片接種10mL 1：10樣品勻液相當於1g樣品，因而表內（nèi）數字（zì）應相應降低10倍。飲料樣品（pǐn）的接種量為33.3mL，大紙片（piàn）接種10mL樣品原液，表內數字應降低100倍。

（五）保（bǎo）存條件

本產品需存放在4℃～10℃冰箱（xiāng）中（zhōng），保（bǎo）質期為一（yī）年，鋁箔袋打開後,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好，放到冰箱中，一（yī）個月內用完。在高濕度的（de）環境中可能出現冷凝水，非常（cháng）好在拆封前將整包回溫至室溫。