續接上篇（piān）

GA和突變係的（de）背景特征

GA品係數量的激增加劇了實驗齧齒類動物中未定義的“混合背景”問題（tí）。這對於那些需要（yào）用兩個（gè）獨立品係通過（guò）雜交子代開展的誘導性和條件（jiàn）性GA模型可（kě）能要給與更高的關注，例如Cre小鼠與Floxp小鼠的（de）雜交。

需（xū）特別關注GA品（pǐn）係背（bèi）景的原因是（shì）即使擁有相同的突變基因，但如果動物遺傳背景不同，也可能（néng）表現出不同的表（biǎo）型。最早（zǎo）報道的案例之一（yī）是經典的糖尿病基因位點(Leprdb)突變，它在C57BL/6背景下會出現短（duǎn）暫的高血糖症，但在C57BLKS背景下卻出現（xiàn）明顯的糖尿（niào）病症狀。其他例子包括動物遺傳背景會對Egfr(表皮（pí）生長因子受體)敲除小鼠生存率造成影響，以（yǐ）及對Pten敲除小鼠的腫瘤發病率造成影響等。因此，每個GA品係都應該對其遺傳背景進行確認，了解其在現有的遺傳背景下是否會對預期表型（xíng）有影響，從而選擇更合適的遺傳背景及對照動物。

對均勻（yún）分布，覆蓋全基因組的遺傳標記進行掃描（miáo），可以（yǐ）用於評估來（lái）自不同（tóng）近交係的基因的比例，典型的遺傳（chuán）背景界定主要用於區分有可能混合的近交係（xì）背景。目前大部分應用的場景是去區分C57BL/6和129的亞（yà）係，因為（wéi）在構建基因敲除/敲入小鼠時，大量應用的是129來源的（de）ES細胞，而幹（gàn）細胞注射用的囊胚供體通常會利用野生型的C57BL/6小（xiǎo）鼠，因此如果在（zài）後續繁育中沒有進行回交，通常會得到B6;129混合遺傳背景的後（hòu）代。混合遺傳背景的（de）問題可（kě）以通過以下方法避免：

（a）將轉基因或核（hé）酸酶（Cas9-sgRNA）注入選定背景的近交係胚胎（tāi）。

（b）在選定背景品係來源的ES細胞中修（xiū）改感興趣的基因。

（c）將嵌合體與用於（yú）構（gòu）建的ES細胞來源背景相同的小鼠品係進行雜交（jiāo）。

對於現有的GA品（pǐn）係，有必要去（qù）確認（rèn）其遺傳背景，如果需要在單一背景上建立品係（xì），則需通過（guò）回交或是在遺傳標記輔助下回交的方式進行。定期用背景品係進行（háng）回交也能最大限（xiàn）度地使遺傳背景保存一致。

遺傳穩定和冷凍保存方案

對於近交係、染色體置換係和同源係，育種方法和遺傳穩定（dìng）計劃有助於最大（dà）限度地減少由於遺傳漂變造成的亞（yà）係分化，也有助於防止與其（qí）他品係意外雜交造成的遺傳汙染（rǎn）。為了減少遺傳漂變，應盡量減少內部育種的傳代次數，並將品係委托給專業機構通過冷凍胚胎和/或精子保存，國外如JAX、EMMA、MMRRC、IMSR、RIKEN，國內如國（guó）家遺傳工程小鼠資源庫等。同時應按（àn）照（zhào）傑克遜實驗室遺傳穩定計劃(GSP)的建議，每10代（dài）更換一次繁殖（zhí）種群（qún），以減緩（huǎn）遺傳漂變（biàn）的積累。對於（yú）遠交係，應盡量減少近（jìn）親繁（fán）殖，保持雜合度，同時也要管理遺傳漂變，否則會導致品係分化。 理想情況下，遠交係的種群應該保持至少25個繁殖對，每代近交係數都應控製在1%以下。

胚胎和配子的冷凍保存策略已被多個儲存庫采用，包括歐洲小鼠（shǔ）突變資源庫（EMMA/INFRAF RONTIER)、基因敲除小鼠計（jì）劃(KOMP)、傑克遜實驗室、動物資源與發展中心(CARD) 和RIKEN生物資源中（zhōng）心。它們（men）可以向實驗室（shì）提供冷凍保存的材料或活體小鼠。這些儲存庫（kù）有助於向全世界的科學界提（tí）供已經（jīng）建立的品（pǐn）係，並為可能丟失的品係提供備份。國際小鼠品係數據庫(IMSR)是（shì）一個（gè）可（kě）在線（xiàn）搜索的數據庫，集成了（le）世界範（fàn）圍內的小鼠品係、庫存和突變ES細胞係，包含近交係、突變係和基因工程小鼠。

參（cān）考文（wén）獻：

[1] Benavides F , T Rülicke,  Prins J B , et al. Genetic quality assurance and genetic monitoring of laboratory mice and rats: FELASA Working Group Report:[J]. Laboratory Animals, 2020, 54(2):135-148.