骨髓穿刺抽（chōu）吸技（jì）术  

骨髓穿刺抽吸技术的早期发展主要集中在人类医学领域，随后逐渐应用于动物研究。最初的（de）技术较为简（jiǎn）单，主要用于获取骨髓样本以进行血液学和病理学分（fèn）析。随（suí）着研究（jiū）需求的增加，骨髓穿刺抽吸的技术逐渐得到了改进和优化，设（shè）备改进方面引入了专（zhuān）用的骨髓穿刺针，这些穿刺针具备更好的设计可（kě）以减少组织损伤和提高样本质量，以及在操作（zuò）过程中引（yǐn）入严（yán）格的无菌技术以减少（shǎo）感染的风险。

骨（gǔ）髓穿（chuān）刺技术（shù）不仅在医学研究中得到（dào）广泛应（yīng）用还扩展到（dào）多个领域。药物研发，评估新药对骨髓的影响，尤其是抗（kàng）癌药和免疫抑制药物的（de）研究（jiū）中；毒理学研究中，同样需要研究有毒物质对骨髓的影响；此外，基因治疗，通过获取骨髓（suǐ）细胞进行基因组（zǔ）研究（jiū）和基因编辑实验等都需要进行骨髓穿（chuān）刺。本文将介绍实验犬的骨髓穿刺抽吸技术。

采集部位

对于犬，骨髓样本通常从股骨转子窝、肱骨近端或髂骨翼采集，其他部位包括胸骨、肋骨（gǔ）。如果骨盆和股骨区域（yù）含有丰富的脂肪组织，采集则会变得更具（jù）挑战性。下文主要讲述犬肱骨近端骨髓采集的操作程序。

肱骨近端骨髓采集

材料和（hé）设备

○ 无（wú）菌手套（tào）

○ 电动剪毛器和清（qīng）洁溶液

○ 局部（bù）麻醉药（如利多卡因、布比（bǐ）卡因）

○ 含（hán）有2.5% - 3%乙二胺四乙酸溶液（EDTA约2 mL）的培养皿

○ 玻璃显微镜载玻片

○ 显微血细（xì）胞比容毛细血管（guǎn）（图A），有毛细血（xuè）管球

○ 11号手术刀片

○ 无菌纱布

○ 10或12ml注射器

○ 14G至18G带针芯的骨髓针（图B和C）

A：骨髓穿刺（cì）所需的材料和设备

B：带盖和针芯的穿刺针

C：已移除盖和针（zhēn）芯（xīn）的穿刺针

操作步（bù）骤

1、在进行深度镇静或全身（shēn）麻醉后（hòu），动物侧卧位，修剪采集（jí）部位的毛发，可以在采集部位皮下注射局部麻醉（zuì）剂（如利多卡因、布比卡因），采集部位无菌清洗。如图1A。

图1A：动（dòng）物侧卧位，采集部（bù）位的毛发已剔除。

2、打开并佩戴无菌手套（tào）。助理辅助将穿刺针、注射器（qì）和手（shǒu）术刀片打开并放入无（wú）菌区域，或将这（zhè）些物品以无菌的（de）方式递给术者。使用（yòng）10或12ml的注射器，在保持无菌（jun1）的情况下，抽取约1ml的EDTA溶液。如图1B 。

图1B：从培养皿中抽取EDTA溶液

3、将注射器放置在（zài）无（wú）菌区域内。移除穿刺针（zhēn）的盖子（zǐ）和针芯，通过顺时针旋转确保针头的防护装置牢固地连接在针头的基部（bù）。将含有EDTA的注射器连接到针头的顶部并旋紧。通过将（jiāng）EDTA喷回培养皿来灌注针头，留（liú）下约0.5 mL的EDTA在注射器中。灌注时保持在（zài）培养皿上方，不要（yào）让无菌针头（tóu）的尖端接触培养皿，然后将注射器从（cóng）针头上移除，置于无菌区域内。重（chóng）新装上针（zhēn）芯和盖子。注（zhù）：在大型犬中，可以移除（chú）针头防护装置，以方便进入髓腔（qiāng）。如图1C。

图1C：用EDTA溶液灌注穿刺（cì）针

4、触摸并确定肱（gōng）骨近端外侧的平坦区域（yù），位于大结节的远端。确定肩胛骨和肱骨之（zhī）间的肩关节，以确（què）保不会误采到该区域。在平坦区域正上方的皮（pí）肤上切开一个小口。如图1D。

图1D：在（zài）肱（gōng）骨近端外侧的平坦区域切开一个小（xiǎo）口

5、牵拉皮肤，将针头“弹入”切口，确保针头已穿（chuān）透深层皮下组（zǔ）织。重新确认肱骨近端外侧的平坦区（qū）域，位于大结节的远端。将针尖直接放在骨头上，垂直于平（píng）面。以顺时针和逆时针旋转的方式适度施加压力，直至针头穿透近端骨皮质。穿透皮质后，减小角度，使针头（tóu）朝向肘（zhǒu）部，平行于髓腔。继续扭转，直到针（zhēn）完全嵌入骨内。如图1E。

图1E：穿刺针弹入（rù）切口

6、移除盖子（zǐ）和针芯，并迅速连（lián）接含有EDTA的注射（shè）器。抽吸至可见红骨髓（2 ~ 5 mL足够），并将内容（róng）物排（pái）出到培养皿。如图1F。

图（tú）1F：将骨髓（suǐ）吸入装有EDTA的注射（shè）器

7、骨髓包含在白色的针状物中，表明穿刺成（chéng）功。使用毛（máo）细管或带有毛细管球或移液管球的巴斯德移液管取出并（bìng）排出这些颗（kē）粒，用于血涂片制备（bèi）。每片至少需要1个针状物；然而，建议每张载玻片至少（shǎo）有3 ~ 5个较大的（de）针（zhēn）状物（wù），以进行充（chōng）分评估（gū）。任何剩余的骨髓内容物都（dōu）可以收集到EDTA管中，并与载玻片一起送往实验室。如图1G。

图1G：使用巴斯德（dé）吸管取出（chū）颗粒以制（zhì）备血涂片

8、在（zài）动物恢复后给与镇痛药物（wù），并根据需要继续使用。

潜（qián）在（zài）的不良反应、缓解措施或治疗方法

1、采样部位感（gǎn）染（rǎn），但这种情况很少见（jiàn）

2、对软组织（zhī）如（rú）神经、肌（jī）肉和关节（jiē）表面的创伤

3、采样部（bù）位出血

4、术后疼痛

缓解措施

○ 密切注意无菌技术

○ 仔细辨别解剖标（biāo）志，准备骨骼/骨标本以正确找到解剖（pōu）标志，避免对周围组织（zhī）造成意外创伤

○ 对（duì）采样部位施加直接（jiē）压力，髓内出血不会引起大的问题，因为血液会迅速被吸收

○ 术后疼痛通（tōng）常是（shì）短（duǎn）暂的，镇痛药（yào）用作镇静/麻醉的预药通常是足够的，但如果需要也可以在术后（hòu）使用

小（xiǎo）结

为了提高骨髓穿刺抽吸的成功（gōng）率和样本质量，必须制定全面的标准操作程序（SOP），涵盖动物准备、麻醉管理、穿刺操作及样本处理等各个环节，并对（duì）实验人员进行系统且广泛（fàn）的培训。此（cǐ）外，实验研究人员应持续优化和改进技术，精细化操作流（liú）程，提升效率与准确（què）性，从而为生物医（yī）学研究提供高质量的样本和可靠的数据支持。