簡介

盡管存在解剖和生理上（shàng）的差異，小鼠在研究人類（lèi）肺（fèi）部疾病，包括急性肺損傷（ALI）和肺纖維化方麵仍具有極高的價值。治療方法（fǎ）是諸多肺部疾病研究的核心，其中口咽吸入法（OPA）已被廣泛用，但其缺點是部分藥劑可能被（bèi）吞入胃腸道，從而導致給藥劑量的不準確；另一（yī）種是經氣（qì）管給藥，這涉及到在（zài）深度麻醉狀態下切開氣管直接將藥物注入到呼吸道，然而（ér），這種操作不僅因其侵入性和造成呼吸道損傷而不可取，還存在耗時過長，且操作者需要大量（liàng）的訓練等問題（tí）。

1999年，Brown等人發表研究論（lùn）文描述了一（yī）種小鼠肺部直（zhí）接插管的方法，後續也有其他幾篇（piān）論文（wén）描述（shù）了不同的小鼠肺部插管方（fāng）法，但這種插管的主要問題是：當插管導管接近（jìn）氣管並準備插入時（shí），導管本（běn）身會阻擋光線，從而無法看清需（xū）要插入的位置。

本文（wén）展示了如何簡單、低成本地消（xiāo）除這個可視化問題，從而確保在相對少的培訓或經驗下成功進行插管。

方法

準備：

1、導管。對於20-35 g小鼠的插管，我們（men）使用1或（huò）1.5英寸長，20 g IV導（dǎo）管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以（yǐ）為每隻小鼠（shǔ）使用新的無菌導管（guǎn），但導管（guǎn）也可以在消毒後用70%乙醇浸（jìn）泡過夜重複使用。盡管小鼠的咽部和氣管不是無（wú）菌的，但應遵循適當的清潔程（chéng）序，包括使用無菌手套和器械。

2、光纖電纜。我們使用約（yuē）70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜，但長度不是決定性的因素。重要的是要確保纖維的邊緣是平滑的（de），因為在用剃刀切割電纜（lǎn）後，邊緣（yuán）相對較銳利，很容易刺穿氣（qì）管壁。然而隻需將光纖端部放在1000粒度的砂紙上，就可以非常容易地打磨平這個邊緣。另一端插入橡膠（jiāo）塞中。最簡便的方法是先用18號針（zhēn）通過橡膠（jiāo）塞，插入光纖通過針孔，然後撤出針。橡膠塞連接150瓦鹵素光源。重要的是要（yào）確保使用矽膠橡膠（jiāo）塞(或其（qí）他耐熱材料)，因為普通橡膠（jiāo）或軟木在靠近熱光源（yuán）時可能會燃燒（shāo）。

插管：

1、參見圖1和2。通過一段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖電纜。將（jiāng）這個橡膠管係（xì）緊，同時仍然允許調整光纖電纜。將矽膠管緊密地插入套管的魯（lǔ）爾端，固定光纖電纜（lǎn）在套管內的位（wèi）置。調整光纖電纜的位置，使其在套管尖端前方約（yuē）4毫米處穿過套管。

圖1.如圖所示，光纜插入矽橡膠塞中，與其相對的另（lìng）一端緊綁著一小段矽橡膠管。

圖2.圖片展示了橡膠塞（sāi）與光（guāng）源的連接，光纖的另一（yī）端穿過插管（guǎn）導管（guǎn）。左側還展示了一個簡單的支架，用於在插管過程中固定小鼠。

2、將（jiāng）麻醉後的（de）小鼠放置在垂直支架上，由其上切牙懸掛(圖3)。大多數研究（jiū）者發現（xiàn），當小鼠的腹側麵向自己時，視（shì）覺效果最佳。非常輕柔地（dì）拔出舌頭（tóu），用拇指和食指握住。中指放在頸部和塑料支架之間。利（lì）用食指和拇指（zhǐ）對舌頭的牽引（yǐn）開啟口腔，並用頸部後方的（de）中指調（diào）整頭部的角度，使插管（guǎn）路徑伸直，如圖3所示。

圖（tú）3.兩個視角展示了準備插管的小鼠位置

3、使用光（guāng）纖電纜作為光源（yuán）和導入器，推（tuī）動它通過可（kě）視化聲帶。如果（guǒ）看不到聲（shēng）帶，可以通過中（zhōng）指作為支（zhī）點（diǎn），輕輕（qīng）用力拉舌頭（tóu）。插入後，將套管再向前推進約（yuē）5 mm。然後，小心不要移（yí）動套（tào）管，拔出光纖電纜（lǎn）。將小鼠平躺下來，用膠帶固定導管，並用橡皮泥(塑型黏土)支撐導管接頭，如圖（tú）4所示。

圖4。此圖（tú）展示（shì）了一隻（zhī）準備通氣的已插管小鼠。圍繞嘴部的膠帶有助於防止導（dǎo）管移動。一小塊橡皮泥(建（jiàn）模黏土)提供了一個便利的（de）支撐點，用於固定導（dǎo）管接頭與呼吸機的連接（jiē）。

4、步（bù）驟3中的操作不（bú）容易演示或教學，因為（wéi）這是一個單獨的操作。然（rán）而，通過對（duì）舌頭的牽引力和頭部後麵的支撐的微妙（miào）調整，幾乎（hū）所有嚐試這種方法的人都會（huì）很快找到正確的方式來（lái）調整小鼠的位置，使聲帶可視化（huà）。

總結

本文描述的方法有幾個優點。首先（xiān），裝置簡單（dān）且價（jià）格低廉。製作裝置不需要任何特殊（shū）工具或昂貴的設備。在實踐中，對於從（cóng）未嚐（cháng）試過插管的研究員、學生和技術人員來說更容易掌握。

在進行（háng）插管時，有幾個（gè）實（shí）際問題需要提（tí）及（jí）。在最初打開小鼠口腔時，盡量（liàng）輕柔拉舌頭非常（cháng）重要。如果使用無保護鉗，很容易損傷舌頭，這（zhè）可能導致小鼠死亡。在首次學習如（rú）何（hé）插管時，最重要的是使用頸部（bù）後方（fāng）的手指來（lái）調整（zhěng）頭部（bù）角度，以使氣管開口的可視化。如果操作正確，對舌頭進行足夠的牽拉，很容易看到聲帶。最初的可視化步（bù）驟（zhòu）通常需要最多的時間（jiān），因為一旦看（kàn）到氣管開口，插入纖維電纜和靜脈（mò）導管就相對簡單了（le）。

總之，本文描述的插管方法製作成本低，使用簡單，可以（yǐ）令大多數研究人員和實驗（yàn）室技術人員在相對較少的經（jīng）驗下快速掌握小鼠插管（guǎn）技術。