血生化檢測

血生化檢測是對實驗動物血液內離子、脂（zhī）類、蛋白質和（hé）各種酶等物質濃度的檢測。這些檢測項目的變化一般都與特定器官的功能有關，對評估實驗動物健康狀態以及驗證實驗動物造模是否成功等，都具有重要指導意義。由於（yú）血（xuè）生化涉（shè）及項（xiàng）目較多，本號將分兩篇對其（qí）進行介紹。

絕大多數血生化檢測（cè）都可以用血清或肝素血漿（jiāng）樣本檢測（cè），兩者的（de）檢（jiǎn）測結果會有差異，但這（zhè）種差異並無臨床意義。然而，對（duì）於需要長（zhǎng）期監測（cè）動物，相（xiàng）同（tóng）指標應在監測周期內選擇相同樣本進行檢測。樣（yàng）本的保存和抗凝劑的使用均（jun1）應根據不同的檢測項目進行選擇。此外，樣本采集的質量（liàng）可直接影（yǐng）響檢測結果。

對於大多（duō）數血生化項目，樣（yàng）本應在采集後及（jí）時檢測，如不能及時檢測，3天內可4℃或冷（lěng）凍（-20℃或更低溫度）保存；若（ruò）保存時（shí）長超出3天，需冷凍（-20℃或更低溫度）保存，切忌將樣本反複凍融後進行檢測（cè）。但一些生化項目低（dī）溫（wēn）保存也會影響其活（huó）性，如乳酸脫氫酶和穀草轉氨酶。

尿素、鉀、鈉離子避免使用含銨鹽類抗凝劑進行檢測；穀丙轉氨酶、肌酸激酶（méi）和總蛋白避免使用枸（gǒu）櫞酸鈉抗凝劑進行檢測。本文僅（jǐn）列出部分生化項的抗凝劑選擇，更多信息可參考WHO 2002年發布的《實驗室（shì）檢查中抗凝劑的使用》。

齧齒動物尤其實驗大小鼠的血生化參考範圍，目前仍沒（méi）有建立（lì）標準參（cān）考。這與實驗大小鼠的品係眾多（duō）有關。已有文（wén）獻證明，不同品係的小鼠血生化會有差異。並且血生化（huà）的結（jié）果與動物的年齡和性別等因素相關。另外，由於不同（tóng）機構使（shǐ）用的檢（jiǎn）測方法（fǎ）不同，如（rú）幹式（shì）生（shēng）化分析儀和濕式生化分析儀，且使用試劑盒品牌不同、試劑盒檢測原理不同等，均會導致結果不同（tóng）。這些因素都導致了（le）實驗大小鼠的血生（shēng）化標準參考範圍無法建立，目前可查到（dào）的參考範圍，均（jun1）應根據內部情況進行參考。

蛋白質與肝膽功能檢測

1.   總（zǒng）蛋白（Total protein, TP）

血（xuè）液等體液中的蛋白質種類眾多，但目前尚（shàng）無（wú）一種常規檢測技術可以對體液中各（gè）種類（lèi）型蛋白質總（zǒng）量（liàng）進行準確測定。因（yīn）此，臨床對體液中總（zǒng）蛋白質測定通常是假（jiǎ）設所有（yǒu）的體液蛋白質均是單純蛋白質，且各種（zhǒng）體液蛋白（bái）與化學（xué）試劑的反應性均（jun1）一致。基於以上兩個假設，目前測定總蛋白最常用的方（fāng）法（fǎ）有雙縮脲法和紫外分光光度法。血清中的總蛋白實際檢測的是（shì）除纖維蛋白原以外的成分，因此用血漿測定總（zǒng）蛋（dàn）白較血清測定值偏高。

總蛋白的濃度主要反（fǎn）應肝髒合成功能和（hé）腎髒（zāng）病變造成蛋白質丟失情（qíng）況，可以用來判斷機體的水合狀態，脫水的動物總蛋白（bái）濃（nóng）度會相對升高（gāo），即高蛋白（bái）血症。當動物出（chū）現慢（màn）性肝髒疾病、骨髓瘤、自身免疫性疾病、慢性炎症和感染等，會導致（zhì）TP和球蛋白同時升高。

過度（dù）水合動物總蛋白濃度會相（xiàng）對降低，即低蛋白血症，此時動物可能會出現浮腫、胸腔或腹腔積液。TP和白蛋白同（tóng）時降低常見於肝功（gōng）能受損導致蛋白質合成減（jiǎn）少、營養不良、蛋白丟失過多、消（xiāo）耗增（zēng）加等病理性因素。

2.   白蛋白（Albumin, ALB）

ALB由肝實質   細（xì）胞合成分泌，是（shì）血漿中含量最多的（de）蛋白質（zhì），大部分動物的白蛋白占血漿蛋白的（de）35%~50%。ALB是動物機體內重要的營（yíng）養蛋白，參與維持內（nèi）環（huán）境穩定，也（yě）是血（xuè）漿中多種物質的（de）主要轉運蛋白。當出現（xiàn）炎性疾病、漿細（xì）胞瘤、淋巴瘤、腎小球腎炎、營養不良、過度水合等，均會導致齧齒（chǐ）動物出現血清白蛋白的（de）降（jiàng）低；ALB升高則多見於脫水動物。

3.   球蛋白（Globulin，GLB）

球蛋白可以分為α球蛋（dàn）白、β球蛋白和γ球蛋白，大（dà）多數α球蛋白和β球蛋白由肝髒合（hé）成，γ球蛋白由漿細胞合成。α球（qiú）蛋白中比較重要的兩種蛋白質分別是高密度脂（zhī）蛋白和極低密度脂蛋白；β球蛋白包括（kuò）補體（C3、C4）、轉鐵蛋白和鐵蛋（dàn）白；γ球蛋白（即免疫（yì）球蛋白）包括（kuò）IgG、IgD、IgE、IgA和IgM。

球（qiú）蛋白的濃度一般通過總（zǒng）蛋白與白（bái）蛋白的差值來進行計算。球蛋白減少主（zhǔ）要由於合成減少，如使用免疫抑製劑；球蛋白的增（zēng）加多見於γ球蛋白，常見原因有（yǒu）慢性肝髒疾病、免疫（yì）性疾病、骨髓瘤等。

4.   白蛋白/球蛋白（A/G）

白（bái）球（qiú）比（bǐ）應結合蛋白（bái）質指標進行分析，不同種（zhǒng）類、品係、年齡、性別動物（wù）的白球比都有差異，很多病理狀態會（huì）改變白球比。當白蛋白和球蛋白均變（biàn）化時，如出（chū）血導致白蛋白和球蛋白（bái）丟失、脫（tuō）水導致（zhì）球蛋白和白蛋白增加時，A/G比值將變化不大（dà）或保持（chí）在正常範圍（wéi）內；當其中一個數值發生變化且占主導時，那麽A/G比值將發（fā）生異（yì）常，如免疫球蛋（dàn）白的產生導致A/G比值（zhí）降低、免疫球蛋白缺乏導致A/G比值增高。在臨床上，ALB、TP、GLB和（hé）A/G比值應（yīng）結合一起進行分析。

5.   穀丙轉氨酶（Alanine aminotransferase, ALT）

臨床上廣泛（fàn）用來作為肝細胞損傷指標，也（yě）是中間（jiān）代謝的（de）關鍵（jiàn）酶。ALT主要存在（zài）於肝髒，但也廣泛存在於腎髒、心肌、骨骼肌、胰腺等組織中，這（zhè）些組織出現損傷或壞死，也會導致（zhì）血清ALT水平升高。由於ALT主要存在於細胞質，釋放比較容易，因此（cǐ）ALT升高可出現在組織損傷早期。血液中ALT的水平與肝損傷的嚴重程度不呈現相關性，ALT通常會在肝損（sǔn）傷12h內升高，並在24~48h內（nèi）達到峰值，除（chú）非存在慢性肝損傷，一般情況下血清（qīng）ALT水平會在幾周內恢複正常。比較（jiào）特（tè）殊的是，豚鼠（shǔ）中ALT活性較低，因此ALT不適合用來作為判斷其肝損傷的標誌物。

目（mù）前已發現在人類、大小鼠和狗中，ALT具有兩種亞型，分（fèn）別為ALT1和ALT2，其中ALT1主要在腎髒、肝（gān）髒（zāng）、脂（zhī）肪和心組織中表達；而ALT2主（zhǔ）要在肌肉和脂肪中表達。在小鼠中，ALT2被認為是脂肪變性的標誌物（wù）。ALT亞型的區分可以更精準反應器官（guān）損傷（shāng）情況，但目前ALT分型的檢測尚未廣泛應用在實驗動（dòng）物（wù）檢測中。

6.   穀草轉氨酶（Aspartate aminotransferase, AST）

AST主要存在（zài）於肝細胞（bāo）內，在正常大（dà）鼠血清中，細胞質中（zhōng）的AST約占總AST活性82%，線粒體膜上的AST約占總AST活性18%。此外，AST也存在於其他組（zǔ）織中，如心髒、骨骼肌（jī）、腎髒、胰腺等，這些組織損傷或壞死時，血清中AST也會升高。AST水平升高表示非特異性肝髒損傷，齧齒動物在應激狀態或肌內注射也可能導致AST升高，AST升高應先檢查血清或血漿樣本是否溶（róng）血，結合肌酸激酶水（shuǐ）平，排（pái）除是（shì）否為肌（jī）肉損傷導致AST升高，上述原因排除後，方可考慮為（wéi）肝損傷導致AST升高。

7.   堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase, ALP）

ALP是一組（zǔ）在酸性條件下水解（jiě）磷酸單酯類（lèi）化合物的（de）酶，在許多組織中存在（zài）其（qí）同工酶，尤其是肝（gān）膽係統、骨骼內的成（chéng）骨細胞、軟骨內的成軟骨細胞、腸道細胞。ALP水平與（yǔ）齧齒類動物（wù）的年齡及性別具有相關性（xìng），處於生長期（qī）的未成年動物ALP水平較高，隨著動物年齡的增長，ALP水平明顯降低；且大多數（shù）雌性動物ALP水平低於雄性動（dòng）物。而ALP的病理性升高則（zé）常見於發生肝膽疾病、骨骼疾病、惡性（xìng）腫瘤時的動物。

8.   γ-穀氨酰轉移酶（Gamma-glutamyltransferase, GGT）

GGT存在於許多組織中，包括腎髒、胰腺、腸道和肌細胞。GGT升高多見於動物發生肝髒疾（jí）病、膽管阻塞以及急性胰腺炎等。需要注意的（de）是，GGT在腎髒中濃度最高，但（dàn）發生腎髒疾病時，GGT的增加並不明顯，這（zhè）是因為GGT會（huì）從受損的管狀上（shàng）皮細胞中釋放到尿液中，而不是血液中（zhōng）。

9.   膽紅素（Bilirubin, Bil）

膽紅素是一種不（bú）可溶性分子，由脾髒內巨噬細胞降解血紅蛋白產生，是各（gè）種含血紅素蛋白中的血色素（sù）在一些（xiē）係（xì）列酶作用下的降解產物，與脂類的消化吸收及黃疸形成具有重要關（guān）係。膽紅素在光照下分解（jiě），因（yīn）此，樣本應避光保存（cún）以保證結果（guǒ）準確性。當（dāng）動（dòng）物出現膽汁運輸障礙或腸道吸收不良時，會導致膽紅素降低；當動物出現溶血性（xìng）疾病（bìng）導致紅細胞破壞或內出血時，可（kě）使膽紅素含（hán）量（liàng）增高。

10.  膽汁酸（Bile acids, TBA）

齧齒動物的膽汁酸代謝與人類有（yǒu）所不同，大小鼠的膽汁酸（suān）以膽固醇為（wéi）原料在（zài）肝細胞中合成，由（yóu）肝源性分子組成，並主要（yào）與牛磺酸結合。膽汁（zhī）酸可以促進脂類的消化吸收、調節膽固（gù）醇的代謝以及促進膽汁分泌。當動（dòng）物（wù）出現肝功能受損、膽道阻塞等疾病時，均會導致膽（dǎn）汁酸水平增加。

腎髒功能檢測

1. 尿素（Urea）

尿素（sù）是哺乳動物蛋白質（zhì）代謝（xiè）的主要終末產物，可自由（yóu）濾過（guò）腎小球，當腎實質受損時，腎小球濾（lǜ）過（guò）率下降，血尿素（sù）濃（nóng）度會升高，因此可以通過測定尿素水平來評估腎功能。需要注意的是，產尿酶菌（如（rú）金黃色葡萄球菌/變形杆菌屬/克雷伯菌（jun1）屬）汙染（rǎn）的血液樣本可導致尿素分解，導致尿素水平下降，為避（bì）免這種情況，樣本（běn）采集後應及（jí）時進行檢測，如不能及時檢測，應將樣本放置（zhì）在冰箱冷藏中保存。另外不（bú）同性別及年齡差異，也會影響尿素水平，隨著動物年齡增長，尿素水平會呈現（xiàn）下降趨勢。尿素的增加多見於高蛋白飲（yǐn）食、脫水以及腎功能衰竭等。

2. 肌酐（Ceatinine, Crea）

血（xuè）肌酐經腎小球濾過進入原尿，並且不被腎小管重新吸收，機體內肌酐應保（bǎo）持恒定，因此測定血肌酐水平可以（yǐ）用來評估腎功能。但是和尿素一（yī）樣，肌（jī）酐不是腎功能的準確指標，當腎功能（néng）損傷近75%時，方可引起血肌酐水平升高。肌酐（gān）降低則多見於動物營養不良、貧血（xuè）等。

3. 尿酸（Uric acid, UA）

尿酸是嘌呤堿基（jī）代（dài）謝產物，主要（yào）存在（zài）於肝髒中，小部分可經肝髒隨膽汁排泄。尿（niào）酸可自由濾過腎小球，也可腎小管排泄。因此，排除（chú）外源性尿酸幹擾，血尿酸可反映（yìng）腎小球濾過功能和腎小管重吸收功能。當機（jī）體出（chū）現急性或慢性腎炎（yán）、多發性骨（gǔ）髓瘤等均會導致UA升高；肝髒壞死、肝功能衰竭等病理原因則會（huì）導致UA降低。